SV40 プラスミド環状DNA

SV40 プラスミド環状DNA
今、もめている＜SV40＞とは、何か？

１．ポリオーマウイルス（２本鎖環状DNAウイルス）には、
　　サルの腎臓に感染するSV40ウイルス、膀胱上皮に感染するBKウイルス、
　　ガン末期やHIV感染者の進行性多巣性白質脳症（PML)を起こす
　　JCウイルスがある。
　　進行性多巣性白質脳症（PML） | 北大腫瘍病理学教室 (hokudai.ac.jp)

２．蛋白質発現に、環状DNA（ベクター）に
　　プロモーター（DNA→RNA転写の開始）を
　　組み込ませて行っているが、多くの場合、
　　HEK293細胞（＊）やCＯＳ-７細胞など
　　ラージＴ抗原（＊＊）を大量に発現させるためのＳＶ４０プロモーターを
　　組み込んでいる。
　　さらに蛋白質発現ベクターを取り込んだ細胞を識別するために、
　　ペニシリン耐性遺伝子を入れてあり、培養の際に、
　　生き残れば、DNAの導入が成功と考えられる。
　　また、蛋白合成阻害効果（失敗作）を評価するのに
　　カナマイシン/ネオマイシン耐性遺伝子（蛋白抑制）も組み込まれ、
　　目的の細胞ができているのかを
　　薬剤スクリーニングで選別可能。
　　＊アデノウイルスDNAをゲノムに組み込んだヒト胚性腎臓細胞で、
　　　組み換え蛋白質の大量生産が可能になった。
　　　HEK293Tは、HEK239にSV40LargeT抗原を発現させたもので、
　　　SV40複製起点（プロモーター）を持つプラスミド（染色体と分離独立的に
　　　複製が可能な染色体外DNA分子）ベクターで、大量の蛋白質生産が
　　　可能（今回はスパイク蛋白質の大量生産）
　　　
　　＊＊腫瘍蛋白質ラージT抗原（LTag）はDNA型腫瘍ウイルスの
　　　　　SV40（ｼﾐｱﾝｳｲﾙｽ）がコードする蛋白質で、
　　　　　P５３を不活化して、癌化（不死化）する。
　　　　　（今回はターボ癌）
　タンパク質発現ベクター｜タンパク質実験｜【ライフサイエンス】｜試薬-富士フイルム和光純薬 (fujifilm.com))

３．SV４０とがん
　　SVシミアンウイルスは、環状型ＤNAウイルスで、細胞侵入後、T抗原を
　　作り、癌細胞に変化させ、P53とRb（網膜芽細胞腫蛋白質）を不活化し、
　　癌細胞は増殖する。シミアンウイルス40 (Simian Virus 40) | 今月の分子 | PDBj 入門

４．P５３腫瘍抑制遺伝子
　　　　　　
結論としては、富士フィルムの大腸菌での実験に使われている
遺伝子操作と同じ。SV４０でT抗原により、細胞を癌化させ、
その増殖細胞で、大量のスパイク蛋白を作らせている。
癌で死ぬか、血栓で死ぬか。